人外周血调节性T细胞鉴定方案

2022-04-08 09:57:04 道赛尔生物 337


CD127 VS Foxp3

虽然Foxp3是目前公认的调节性T细胞最特异的指标,但因其位于细胞内,使得Foxp3的染色必须要固定细胞并破核膜,因此这种方法并不适用于分离活的Tregs,且该方法比较传统,操作相对复杂,稍有不慎就会影响实验结果

而CD127属于细胞表面Marker,无需固定破膜。因此,当前主流方向是通过CD127来检测人Tregs。


CD127的发现

CD127是2006年被发现的一种检测CD4+CD25+调节性T细胞的新指标。由于不需要将细胞固定破膜处理,检测起来要比Foxp3方便。

研究发现,CD4+CD25+纯化的细胞中,CD127与Foxp3的表达呈负相关。通过CD4+CD127low纯化出的CD4+CD25+ T细胞,与Foxp3纯化的CD4+CD25+ T细胞数量相似,并且这部分细胞展现了CD4+CD25+调节性T细胞的典型特征。CD4+CD25+CD127-/low是较CD4+CD25+Foxp3+更优的特异性检测Tregs的表面标记分子



配色方

道赛尔


人Treg鉴定所需流式抗体

道赛尔

人Treg鉴定所需辅助试剂

道赛尔


样本管设置

道赛尔


实验步骤

1、在离心管内加入100μL新鲜血,与2mL 1×ACK红细胞裂解液混匀,4℃裂解10min;

2、300g离心5min(裂解完立即离心,防止时间过长损伤细胞),弃掉上清,用移液枪轻轻吸走残液,可以得到白色的细胞沉淀;

3、加入100μL细胞染色缓冲液,重悬细胞,与流式抗体混匀,4℃孵育30min;

4、加入2mL细胞染色缓冲液,300g离心5min,弃掉上清,再加入200μL细胞染色缓冲液,重悬细胞;

5、上机进行检测。


实验结果

道赛尔

人外周血Treg细胞表型分析



解析:

荧光素间有溢漏,故需要设置单阳管,用于调节补偿;

本实验取正常人外周血验证,无生物学对照;

增加CD45指标,便于淋巴细胞圈门

圈门路径:

第一步,根据CD45和SSC-H,圈出淋巴细胞群;

第二步,利用FSC-H和SSC-H,去黏连,得到单细胞;

第三步,通过CD3,确定CD3+ T细胞;

第四步,通过CD4和CD8,得到CD4+辅助T细胞;

第五步,通过CD25+CD127-/low,确定出Treg细胞亚群。



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