细胞培养基础篇-复苏

2021-08-07 09:00:29 道赛尔生物 375

细胞培养看似简单,但实则有很多细节需要注意,今天就从最基础的细胞复苏说起,当然内容主要还是针对新入门的“学徒”,如有不足之处,也请广大站友不吝赐教。


操作步骤:

1.从液氮罐中取出冻存管,放入37度水浴锅中融化,800-1000rpm离心3-5min;

2.慢慢吸去上清,加入适量完全培养基重悬细胞团,转移至培养皿或细胞瓶;

3.补足完全培养基,放37度培养箱中培养。



注意细节:

1.从液氮罐中拿出冻存管时要做好防护工作,特别是避免液氮溅到眼睛里,有条件的实验室可以配备防冻手套和护目镜;

2.取出的冻存管要先确认管内没有液氮,再放入37度水浴锅,有液氮的情况下很容易因为管内压强突然增大而导致冻存管炸裂,轻则细胞无法使用,重则伤及实验人员;

3.融化过程中要不断轻轻摇晃冻存管,使其尽快融化,但摇晃程度要把握得当,不能让水浴锅中的水渗进冻存管中;

4.离心的具体转速和时间视细胞而定,通常难养的细胞需要降低转速,缩短时间,以减少离心对细胞的伤害;

5.部分对离心敏感的细胞(主要是原代细胞)可以采用融化后不离心,直接重悬后补足培养基培养,待其贴壁后再换液去掉冻存液中DMSO的方式处理;

6.如果冻存细胞量不多,可以在冻存管盖上标注离心方向,以便确定离心后细胞团位置,吸去上清时调整冻存管角度,使细胞团位于最下方,可以尽量减少细胞损失。

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