入门级细胞实验注意事项,总有一个是你要的!

2022-02-24 08:53:47 管理员 297

1、什么培养基中可以省去加酚红?

研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,不用加。

2、何时须更换培养基?

视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。

3、可否使用与原先培养条件不同的培养基?

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

4、可否使用与原先培养条件不同的血清种类?

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5、悬浮性细胞应如何传代处理?

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。

6、冷冻管应如何解冻?

取出冷冻管后,须立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其尽快全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另外,冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。

7、细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15 mL新鲜培养基的培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。

8、欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

回收动物细胞,其离心速率一般为300×g(约1000 rpm),5-10 分钟,过高的转速,将造成细胞死亡。

9、细胞冷冻培养基的成份为何?

动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95% 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。

10、冷冻保存细胞的方法?

冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃,30-60分钟→置于-20℃,30分钟→置于-80℃,16-18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。

冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3 ℃至-80℃以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20℃不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤,接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微 降低一些。

11、细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

冷冻管内细胞数目一般为1×106 cells/mL vial,融合瘤细胞则以5×106 cells/mL vial 为宜。

12、培养基中是否须添加抗生素?

除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。

13、CO2培养箱的水盘如何保持清洁?

定期(至少每两周1次)以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。

14、 为何培养基保存于4℃冰箱中,颜色会偏暗红色,且pH值会越来越偏碱性?

培养基保存于4℃冰箱中,培养基内的CO2会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中的酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。

培养基偏碱的结果,将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时,可以通入无菌过滤的CO2,以调整pH 值。

15、各种细胞培养用的dish,flask是否均相同?

不同厂牌的dish 或flask,其所coating的polymer不同,制造程序亦不同,虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因使用厂牌不同的dish 或flask 而有显著的生长差异。

16 、购买的细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少的情形?

研究人员在冷冻细胞的培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

17、购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于-80℃太久。


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