细胞功能实验

2022-03-18 08:36:07 道赛尔生物 1622

细胞功能实验服务主要包括基因过表达、基因沉默、细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移与侵袭、双荧光素酶报告基因系统等项目。

道赛尔

一、基因过表达服务

目的基因过表达是研究基因功能常用的手段之一。基因过表达稳定细胞系已经广泛应用于生物学研究,包括基因调控、蛋白质工程、重组抗体制备、药物研发等。将目的基因通过转染或病毒包装的方法,能够实现目的基因过表达的稳定细胞系。

  • 载体构建-将目的基因克隆入高效表达载体中。

  • 转染或转导-通过电转染、转染试剂(脂质体等)或病毒包装的方法将外源基因转染或转导入细胞。

  • 筛选-根据表达载体的筛选标记,优化筛选药物浓度,进行阳性细胞克隆筛选,如嘌呤霉素、G418筛选等。

  • 扩大培养-挑取单克隆细胞,进行扩大培养。

  • 目的基因表达检测-通过PCR、qRT-PCR、Westernblot等方法,从DNA、mRNA、蛋白水平进行目的基因的表达检测。

  • 稳定性验证- 所有过表达细胞系都经过了严格的测试和验证,其稳定性能保持25代以上,且保证均无支原体污染。

  • 功能性验证- 对外源基因表达蛋白进行功能性检测。GPCR过表达细胞株一般采用报告基因方法和(或)胞内钙流检测方法进行活性测定。


二、基因沉默服务

RNA干扰(RNA interference, RNAi) 现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA(double strand RNA, dsRNA) 导入细胞后,能特异性地降解该mRNA,从而产生相应的功能表型缺失。RNAi提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。现今发现的主要起干扰作用的RNAi主要有两类小分子RNA:一类是microRNA(miRNA);另一类是siRNA(small interfering RNA)。

siRNA制备的方法一般有:化学合成siRNA,哺乳动物细胞载体shRNA克隆和慢病毒载体shRNA克隆。 哺乳动物细胞构建shRNA质粒直接转染或通过病毒包装后转染细胞,并对转染细胞进行阳性鉴定和转代细胞株的培养,最终实现对特定基因特异性敲低的作用。

基因沉默服务的优势:

  • 慢病毒载体类型:最齐全的病毒包装载体

  • 安全性:最安全的第三代/第四代慢病毒包装体系

  • 超高滴度:精心优化的启动子和慢病毒包装细胞,实现超高滴度的病毒包装

  • 载体容量:独特的载体设计,最大可高效包装


三、细胞增殖服务

细胞增值:是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖,通过分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,最终发育成一个新的多细胞个体。

细胞增殖检测的最准确方法之一,就是直接测定DNA的合成,同时也是测定物质毒性、评估药物安全、细胞健康的基本方法。通过检测细胞增殖活性,可以指示肿瘤细胞增殖活性、目的基因瞬转/稳转细胞系的细胞增殖活性,在小分子化合物/多肽等药物筛选及功能安全性研究、中药/中间体等药物筛选及功能安全性研究、目的基因过表达的基因功能研究、目的基因RNAi干扰的基因功能研究中发挥重要作用。


四、细胞凋亡服务

细胞凋亡(Apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。作为细胞的一种基本生物学现象,细胞凋亡是机体为更好地适应生存环境,而主动争取的一种死亡过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,一般过程包括4个阶段,即:诱导启动、细胞内调控、实施和凋亡细胞的吞噬搬运。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。


五、细胞迁移与侵袭服务

肿瘤细胞迁移(migration)与侵袭(invasion)检测均为能够间接反映肿瘤迁移或侵袭能力,或特定情况下的迁移或侵袭能力的实验。通过研究肿瘤细胞的迁移与侵袭能力,能够为探究肿瘤发生及转移的机制提供重要的实验支撑。我司具有多年细胞检测经验,可以为客户提供多种高端优质服务,并能够根据客户的具体需求进行实验设计与规划,为客户提供完美的解决方案。


六、双荧光素酶报告基因系统

双荧光素酶报告基因实验系统采用荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统。实验中,报告基因(荧火虫荧光素酶)活力的改变,与基因表达的特定实验条件相关;而示踪基因(海肾荧光素酶)作为内对照,使测试不被实验条件变化所干扰,减少内在的变化因素所削弱的实验准确性,如,培养细胞的数目和活力的差别,细胞转染和裂解的效率等。荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶测试的组合,提供了双遗传报告基因应用的理想测试系统。

双荧光素酶报告基因系统应用领域:

  • 潜在启动子/启动子核心区域检测。

  • 潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测。

  • 启动子区可能的转录因子结合位点检测。

  • 启动子/增强子与转录因子的相互作用,病毒/细胞相互作用。

  • 药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强)。

  • 射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强)。



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